膠體金免疫標記培訓班資料(doc 26頁)

一、膠體金的製備
二、蛋白-金複合體的製備
三、樣品的固定、包埋與標記

一、膠體金的製備
根據不同的製備方法，可以製備出直徑1－500nm的膠體金粒子，但做為免疫標記探針，其直徑應在3-30nm範圍內。
在氯化金（HAuCl4）水溶液中加入還原劑使之還原並聚積形成膠體金粒子。使用不同種類、不同劑量的還原劑，可以控製所產生的粒子大小。即粒子大小取決於反應溶液中最初還原試劑和還原核的數量。還原劑濃度越高，核濃度也越高，氯化金的還原也就從更多的還原中心開始，因此產生的膠體金粒子數量越多，但體積也越小。粒子直徑每增加一倍，數量減少為原來的1/8。
以檸檬酸鈉和單寧酸做還原劑，能夠製備大小相對一致、直徑3～16nm的膠體金。因此一般膠體金探針均使用該方法進行。但該方法製備的膠體金粒子直徑範圍較窄，而且殘留的多聚單寧酸殘基往往幹擾某些蛋白與金粒子的結合。此時在溶液中添加0.1～0.2％的H2O2能夠去除這些殘基。雙標記或製備5-10 nm的膠體金時建議使用該方法。

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