基因工程技術概述(ppt 51頁)

主要內容
基因工程技術
定義：
應用：
基因工程基本步驟：
基因工程流程示意圖
構建重組分子（連接）
目的基因片段來源：
目的基因來源選擇：
PCR：
片斷的回收與純化
載體：
穿梭載體(shuttIe vector)
質粒載體
克隆載體: PBR322
TA 克隆
TOPO-TA
表達載體：帶有調控基因表達所必需的轉錄與翻譯元件，如啟 動子等，這些調控元件應與宿主細胞相適應。
真核表達載體：大多是穿梭載體。
pFLAG-CMV係列(Sigma)
Tet-On/Tet-Off Expression Systems
DNA分子的體外連接：方法
兩種情況：
堿性磷酸酶處理：
平頭末端：
其他方法：
連接策略：
選擇連接位點：
連接濃度：
連接反應：
連接酶：兩種
其他酶：末端修飾酶
重組子導入受體細胞：
重組子導入受體細胞：途徑
轉化
感受態菌製備
氯化鈣法：原理
重組子的篩選：
插入失活：
α互補現象：藍白斑篩選
Protocol:
陽性克隆的鑒定：
堿裂解法
試劑作用：
初步鑒定
後續：

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