重組DNA表達係統課件(PPT 120頁)

重組DNA表達係統天津科技大學生物工程學院羅學剛
體係選擇
一、體外表達係統（無細胞表達係統）
二、原核表達係統
（一）大腸杆菌表達係統
大腸杆菌表達載體分類
常用表達載體
特殊的表達用菌株
外源基因在原核細胞中的表達形式
融合基因的表達
融合蛋白的特點
融合方式
各種融合蛋白表達載體
各種用於抗體識別的標記
讓表達產物可溶化
讓蛋白質分泌到間質去
融合蛋白的專一性切割
分泌型表達
分泌型載體的優點
非融合蛋白的表達
包含體（包涵體）
包含體來源蛋白質的複性
（二）枯草芽孢杆菌表達係統
其他
三、真核表達係統
（一）酵母表達係統
（二）昆蟲細胞表達係統
（三）哺乳動物細胞表達係統
新黴素抗性選擇係統
外源基因導入哺乳動物細胞
轉染方法
磷酸鈣法
脂質體
顯微注射法
電穿孔轉染法（electroporation）
以病毒為載體的生物學轉染法
外源基因在真核細胞中的表達方式
瞬時表達係統
穩定表達係統
（四）轉基因植物
轉基因植物表達體係的問題及解決方案
（五）轉基因動物技術及其新藥研發中的應用
一、轉基因動物的技術研究
▲方法：
1.原核顯微注射法
▲原核顯微注射法優缺點：
2．多能性幹細胞法
▲胚胎幹細胞法的優缺點：
缺點：許多嵌合體轉基因動物生殖細胞內不含有轉基因，須進一步雜交才能獲得轉基因動物。
3．病毒載體法
▲病毒載體法優缺點：
4．精子介導的基因轉移法
5．核轉移法
與DNA顯微注射法相比：
6.轉基因動物的誘導表達係統
tet係統：
Cre/loxP重組酶係統
二、轉基因動物在新藥研發中的應用
1．藥物作用靶點的研究與發現
2．轉基因動物模型在新藥篩選中的應用
一些已成功構建的轉基因動物疾病模型
3．轉基因動物生物反應器生產蛋白質類藥物
部分已成功采用轉基因動物乳腺生物反應器表達的藥用蛋白質
謝謝大家！

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