基因功能分析的基本策略課件(PPT 71頁)

轉基因模型是研究基因功能的主要手段
第一節 轉基因技術
一.轉基因生物的意義
二、基本原理
基本原理
基本過程
1. 上遊—基因改造和載體構建
動物轉基因常用的載體
2. 中遊—基因轉移、胚胎移植與建係
1) DNA顯微注射法
DNA 顯微注射
DNA 顯微注射法的特點
提高顯微注射 DNA 表達的成功率
2) 胚胎幹細胞法
胚胎幹細胞法
胚胎幹細胞的分離和培養
胚胎幹細胞外源 DNA 的導入
外源 DNA 的整合
胚胎幹細胞法的特點
3）逆轉錄病毒感染法
逆轉錄病毒感染法
逆轉錄病毒感染法的特點
4）精子載體法
3. 下遊—基因整合與表達檢測及篩選
鑒定方法
基因轉移鼠純合鼠係的建立
三、轉基因動物的應用
人類疾病的轉基因動物模型
利用轉基因動物反應器生產藥用蛋白
轉基因改良移植器官
動物的克隆
核移植技術（Nuclear Transfer)
第二節 基因打靶
一、基因打靶的基本程序
1. 打靶載體的構建
2. 打靶載體導入ES細胞
打靶載體的正-負選擇
打靶載體的正篩選
打靶載體的負篩選
PCR 鑒定
PCR 鑒定：特異整合
基因敲除小鼠的獲得
基因敲除和 RNA 幹擾
第三節 RNA 幹擾
RNA 幹擾是dsRNA 導致的基因沉默
RNAi 是真核生物中廣泛存在的現象
RNA 幹擾
siRNA 的產生
siRNA 誘導同源序列的降解
基因沉默的機製是多方麵的
RNAi 和基因敲除
dsRNA 能夠誘發細胞的抗病毒反應
siRNA 與 shRNA
shRNA 表達載體係統
miRNA 表達載體係統
siRNA 設計原則
shRNA 與 siRNA 應用的局限
shRNA 與 siRNA 的比較
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