根瘤菌質粒的快速檢測‘.ppt12

根瘤菌質粒的快速檢測
目的要求
實驗材料
實驗程序
思考題
目的要求
了解根瘤菌質粒的有關特性

學習並掌握根瘤菌質粒的快速檢測方法
實驗材料Ⅰ
PA液體培養基：
蛋白腖4g、MgSO4?7H2O 5g、dH2O（蒸餾水）1000mL、pH 6.8—7.0。
TY固體培養基： 胰蛋白腖5g、酵母粉3g、CaCl2?6H2O 1.3g、dH2O 1000mL、pH7.0。
10 X TBE電泳緩衝液： Tris108g、H3BO3 55g、EDTA 9.3g、dH2O 1000mL、pH 8.3。
Tris-蔗糖溶液： 蔗糖25g、0.025mol? L-1Tris-HCl（pH8.0）100mL、高壓滅菌後40C保存。
RNA酶緩衝液： Tris-HCl（ pH7.5）10m mol、NaCl 15 m mol、高壓滅菌後40C保存。
實驗材料Ⅱ
RNA酶溶液：RNA酶（Ribonuclease A，Sigma公司產品）4mg、 RNA酶緩衝液10mL、分裝於小管中，1000C水浴中處理15min以滅活DNA酶，-200C保存。
溶菌酶溶液：溶菌酶（Lysoxyme，Sigma公司產品）100mg、滅菌雙蒸水（d2H2o）5mL、分裝於小管中，每管50?L，-200C保存。
裂解液（臨用前配製）： Tris-蔗糖1mL（用後歸於40C）、溶菌酶溶液（20mg/mL）50?L、 RNA酶溶液（400 ?g/ mL）50?L、溴酚藍指示劑1—2滴。

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