應用限製性顯示技術製備HCV cDNA診斷基因芯片探討(pdf 6頁)

應用限製性顯示技術製備HCV cDNA診斷基因芯片探討內容提要：
製備丙型肝炎病毒(HCV)檢測芯片並進行驗證、初步檢側質量評價.采用限製性顯示(Restriction (1iyday.
RI))技術製備芯片探針，從載體pCV-J4IfiS中切出HCV全長cDNA, Sau3A I酶消化，所得的限製性片段進行RD-PCR
擴增，經聚丙烯酸胺電泳(PACE.)結合銀染法進行分離。切膠回收後作3次PCR.得到較純淨的HCV cINA限製性
片段.擴增後的產物克隆至pM1)18-T載體進行快速鑒定。將篩選出的限製性片段打印在氨基修飾的玻片上製備
成檢測芯片進行雜交驗證分析.對芯片檢測進行優化、初步的質量評估.運用RI)技術.得到24個200一800坤、大
小均一的基因片段，序列分析表明，均屬於HCV特異基因，可以作為診斷芯片探針;雜交、側序結果顯示，芯片檢測
的敏感性、特異性、準確度、重複性、線性等指標均佳。利用RD技術製備基因芯片探針是一種快速、簡便的實用方
法:製備的診斷芯片可以用於檢側HCV RNA.具有敏感、檢測結果較為可靠的優點。

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