脊髓腫瘤壞死與切割損傷導致的機械行業(PDF 37頁)

主要內容：
用TNF．Ⅸ抗體進行免疫組織化學染色(SABC法)，脊髓切片采用漂浮法，主要過程如下：
1．冰凍切片10mm，室溫放置30分鍾後，放入4。C多聚甲醛固定10分鍾，PBS振動漂洗5分鍾×3次；
2．3％H。0：室溫孵育5’10分鍾，以消除內源性過氧化物酶的活性；
3．PBS振動漂洗5分鍾x 3次；
4．入含0．3％Triton X-100的5％正常牛血清(PBS稀釋)封閉，室溫孵育l小時；
5．傾去血清，滴加含0．1％Triton X一100的多克隆兔抗TNF一0【(1：1000)，4℃冰箱孵育過夜；
6．PBS振動漂洗，5分鍾x 3次；
7．滴加羊抗兔IgG，37"C孵育2．5小時；
8．PBS振動漂洗，5分鍾×3次；
9．滴加生物素一卵白素一辣根過氧化物酶複合物(ABC，臨用前30分鍾配置)，室溫孵育一小時；
10．PBS衝洗，5分鍾×3次；
11．新鮮配製的含0．03％H：O。的0．05％DAB顯色液室溫避光顯色5分鍾，PBS終止反應：
12．裱片，自然幹燥，常規脫水透明，中性樹膠封片。
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