轉化子的篩選與重組子的鑒定培訓教材(PPT 35頁)

轉化子的篩選與重組子的鑒定
為什麼要進行轉化子的篩選和重組子的鑒定？
三者的關係
轉化子的篩選與重組子的鑒定方法
噬菌斑篩選法
PCR鑒定法
菌落原位雜交法
原位雜交的操作程序
探針的製備
探針的標記
5＇端標記法
缺刻前移標記法
蛋白質生物功能檢測法
放射免疫原位檢測法
蛋白凝膠電泳檢測法
在DNA體外重組實驗中，
外源DNA片段與載體DNA的連接反應物一般不經分離直接用於轉化，
再加上重組率和轉化率的不理想，
因此必須通過篩選和鑒定來區分轉化子與非轉化子、
重組子與非重組子、期望重組子與非期望重組子。
轉化子：接納載體或重組分子的轉化細胞。
非轉化子：為接納載體或重組分子的非轉化細胞。
重組子：含有重組DNA分子的轉化子。
非重組子：僅含有空載載體分子的轉化子。
期望重組子：含有目的基因的重組子。
非期望重組子：不含目的基因的重組子
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