幹擾素製備的工藝流程圖教材(PPT 28頁)

幹擾素的製備流程
幹擾素
什麼是幹擾素?
概念(interferon,IFN):機體免疫細胞產生的一類細胞因子,是機體受到病毒感染時
,免疫細胞通過抗病毒應答反應而產生的一組結構類似、功能接近的生物調節蛋白。
根據分子結構和抗原性的差異分為α、β、γ、ω等4個類型。
α幹擾素又依其結構分為α1b、α2a、α2b等亞型
其區別在於個別氨基酸的差異上,早期幹擾素是用病毒誘導人白血球產生的,產量低、
價格昂貴,不能滿足需要，,現在可利用基因工程技術並在大腸杆菌中發酵、表達來進行生產。
3、堿裂解法
1）將洗過的500ml培養物的細菌沉澱物[來自收獲細菌的步驟3]重懸於10ml(18ml)溶液Ⅰ中。
溶液Ⅰ：50mmol/L葡萄糖25mmol/LTris.Cl(Ph8.0)
10mmol/LEDTA(Ph8.0)
溶液Ⅰ可分批配製，在101bf/in2(6.895x104Pa)高壓下蒸汽滅菌15分鍾，貯存於4℃。
2）加1ml(2ml)新配製的溶菌酶溶液[10mg/ml,溶於10mmol/LTris.Cl(Ph8.0)]。
當溶液的pH值低於8.0時，溶菌酶不能有效工作。
3）加20ml(40ml)新配製的溶液Ⅱ。
溶液Ⅱ：0.2molLNaOH(臨用前用10molL貯存液現用現稀釋)1%SDS
蓋緊瓶蓋，緩緩顛倒離心瓶數次，以充分混勻內容物。於室溫放置5-10分鍾。
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