獸疫鏈球菌的改良及其發酵生產透明質酸論文(DOC 73頁)

1 緒論....1
1.1 透明質酸的理化性質....1
1.2 透明質酸的分布及生理功能....1
1.2.1 透明質酸的分布....1
1.2.2 透明質酸生理功能....2
1.3 透明酸的應用....2
1.3.1 在化妝品中的應用....2
1.3.2 在醫學方麵的應用....3
1.4 透明質酸生產現狀....3
1.4.1 獲得高產菌株....4
1.4.2 培養基及發酵條件優化....5
1.4.3 發酵液中透明質酸含量檢測方法....5
1.4.4 透明質酸的提取....6
1.5 課題研究內容和目的....6
1.5.1 本課題研究內容....6
1.5.2 本課題主要目的....7
2 透明質酸產生菌的分離、篩選與初步鑒定....8
2.1 實驗材料....8
2.1.1 采樣....8
2.1.2 主要培養基及溶液組成....8
2.2 實驗方法....9
2.2.1 透明質酸的分離純化....9
2.2.2 菌種的篩選....10
2.2.3 菌種的初步鑒定....10
2.3 實驗結果與討論....11
2.3.1 菌種的篩選....11
2.3.2 菌種的分類鑒定....13
2.4 本章小結....13
3 透明質酸含量檢測方法建立....14
3.1 實驗材料....14
3.1.1 主要儀器....14
3.1.2 主要試劑....14
3.2 實驗方法....15
3.2.1 透明質酸的初步純化....15
3.2.2 CTAB比濁法....15
3.2.3 改良Bitter-Muir法....15
3.3 結果與討論....15
3.3.1 CTAB比濁法....15
3.3.2 Bitter-Muir法....20
3.3.3 兩種方法準確性比較....22
3.3.4 兩種方法精確性比較....22
3.3.5 兩種方法直接測定發酵液中HA含量的比較....23
3.4 本章小結....23
4 透明質酸高產菌的誘變選育....24
4.1 實驗材料....24
4.1.1 菌種....24
4.1.2 主要培養基及溶液....24
4.1.3 主要儀器....25
4.2 實驗方法....25
4.2.1 LiCl處理....25
4.2.2 紫外誘變....25
4.2.3 NTG誘變....25
4.2.4 微波誘變....26
4.2.5 紫外+NTG誘變....26
4.2.6 紫外+NTG+微波誘變....26
4.2.7 中間培養....26
4.2.8 稀釋塗板....26
4.2.9 突變菌株篩選....27
4.3.10 分析方法....27
4.3 結果與討論....27
4.3.1 紫外誘變最佳時間的選擇....27
4.3.2 NTG誘變最佳條件....28
4.3.3 微波誘變最佳條件選擇....30
4.3.4 誘變結果分析....30
4.4 本章小結....33
5 透明質酸發酵法生產工藝條件的初步研究....35
5.1 實驗材料....35
5.1.1 菌種....35
5.1.2 培養基....35
5.2 實驗方法....36
5.2.1 發酵條件的優化....36
5.2.2 添加劑對發酵的影響....37
5.3 結果與討論....37
5.3.1 發酵條件優化結果....37
5.3.2 添加劑的影響....40
5.4 本章小結....42
6 透明質酸合成酶基因克隆與載體構建初步研究....43
6.1.1 菌株、質粒....43
6.1.2培養基....43
6.1.3 酶、化學試劑....44
6.1.4主要實驗試劑配方....44
6.1.5 PCR擴增用引物....44
6.2 實驗方法....45
6.2.1 提取獸疫鏈球菌總DNA....45
6.2.2 目的基因的PCR擴增....45
6.2.3 PCR擴增DNA片段的回收純化....46
6.2.4感受態細胞的製備....46
6.2.5 質粒DNA（PET-22b）的提取與檢測....47
6.2.6目的基因片段和質粒的雙酶切....47
6.2.7 雙酶切產物回收....47
6.2.8 雙酶切後的目的基因和質粒連接....48
6.2.9 重組質粒PET-22b導入E.coli DH5а感受態細胞....48
6.2.10 重組質粒的提取....48
6.3 結果與討論....48
6.3.1 基因組總DNA提取結果....48
6.3.2 hasA片段的PCR擴增....49
6.3.3質粒DNA（PET-22b）的提取結果....50
6.3.4 hasA基因和PET-22b雙酶切電泳檢測....51
6.3.5 重組質粒的表達....51
6.3.6 轉化子的測序驗證....52
6.4 本章小結....53
7 結論與展望....54
參 考 文 獻....56
攻讀碩士學位期間研究成果....60
致 謝....61
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