生產菌株的篩選及腈水合酶催化反應條件優化(DOC 49頁)

2 材料與方法
2.1 材料
2.1.1菌種
2.1.2培養基
2.1.3主要試劑
2.1.4主要儀器
2.2.1菌種培養方法
2.2.2高酶活煙酰胺生產菌種的誘變及選育
2.2.4煙酰胺的提取
2.2.5煙酰胺生產過程中酶催化反應條件優化
3.1.1 ARTP誘變
3.1.2微波誘變
3.1.3 EMS誘變
3.1.4 複合誘變
3.1.5突變菌株的遺傳穩定性實驗
3.1.6煙酰胺高產菌株NHD-1生長曲線的測定
3.1.7生長過程中腈水合酶活性的測定
3.1.8 實驗小結
3.1煙酰胺高產菌株初篩
3.2.1煙酰胺標準曲線繪製
3.2.2 HPLC紫外檢測波長的確定
3.2.3 HPLC流動相流量的確定
3.2.4 HPLC流動相比例的確定
3.2.5 HPLC檢測最佳條件
3.2煙酰胺檢測條件優化
3.3煙酰胺提取
3.4.1菌體濃度的確定
3.4.2菌齡的確定
3.4.3底物濃度的確定
3.4.4溫度的確定
3.4.5 PH的確定
3.4.6 最佳反應時間
3.4.7 煙酰胺濃度對腈水合酶活力的影響
3.4.8響應麵法優化煙酰胺生產條件
3.4.9實驗小結
3.4煙酰胺生產過程中酶催化反應條件優化
3.5結論
圖1-1 NSA分子式
圖1-2 煙酸分子式
圖2-1 煙酰胺和3-氰基吡啶出峰時間圖
圖3-1 ARTP誘變致死率曲線與突變率變化圖
圖3-10 煙酰胺標準曲線
圖3-11 煙酰胺與3-氰基吡啶紫外吸收光譜圖
圖3-12 不同紫外檢測波長下煙酰胺出峰情況
圖3-13 不同流動相流量下煙酰胺出峰情況
圖3-14不同流動相流量比例下煙酰胺出峰情況
圖3-15 產物提取後煙酰胺成品圖片
圖3-16 提取後產物與煙酰胺標品檢測結果
圖3-17 不同菌體濃度下腈水合酶活性
圖3-18 不同菌齡下腈水合酶活性
圖3-19 不同底物濃度下腈水合酶活性
圖3-2 不同微波強度時致死率曲線與突變率變化圖
圖3-20 不同溫度下腈水合酶活性
圖3-21 不同PH下腈水合酶活性
圖3-22 不同反應時間下腈水合酶活性
圖3-23 不同煙酰胺濃度下腈水合酶活性
圖3-24 優化結果響應分析圖
圖3-25 回歸模型分析結果驗證
圖3-3 不同微波誘變時間時致死率曲線與突變率變化圖
圖3-4 不同EMS濃度時致死率曲線與突變率變化圖
圖3-5 複合誘變後腈水合酶的酶活力
圖3-6 複合誘變後菌落不同形態圖
圖3-7 突變株遺傳穩定性變化圖
圖3-8 菌株NHD-1生長曲線圖
圖3-9生長過程中NHD-1酶活變化圖
表2-1 主要試劑規格及生產廠家
表2-2 主要儀器型號及生產廠家
表2-3 Plackett-Burman實驗設計
表3-1 複合誘變後菌落不同形態特性
表3-2 Plackett-burman實驗設計
表3-3 各影響因素顯著性分析
表3-4 響應麵優化設計中各因素水平
表3-5 響應麵優化設計設計
表3-6 SAS統計分析主要結果
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